Оттаивание спермы в гранулах и ее оценка
Для оттаивания спермы в пунктах искусственного осеменения, замороженной в открытых гранулах, необходимо иметь :
- стерильные стеклянные флаконы объемом 10 мл;
- 2,9%-ный раствор лимоннокислого натрия, расфасованный в ампулы по 1 мл;
- водяную баню или специальные оттаиватели;
- спиртовый термометр до 50°С;
- стерильный анатомический пинцет длиной 25-30 см;
- стерильные марлевые салфетки;
- полотенце;
- тампонницу с тампонами, пропитанными 96°-ным спиртом-ректификатом;
- штатив;
- микроскоп с нагревательным столиком;
- чистые предметные и покровные стекла;
- защитные очки.
Перед началом работы проводят влажную уборку рабочего стола, дезинфицируют спиртовыми тампонами его поверхность. Стерильный инструмент раскладывают на рабочем столе, включают водяную баню или оттаиватель и микроскоп с нагревательным столиком.
В водяную баню или оттаиватель помещают необходимое количество флаконов или ампул с 1 см3 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия, а на нагревательный столик микроскопа кладут чистые предметные и покровные стекла.
После того, как температура водяной бани или оттаивателя достигнет рабочего диапазона (38-40°С), надевают защитные очки, открывают крышку сосуда Дьюара, охлаждают погружением в жидкий азот бранши пинцета, быстро подтягивают к верхней трети горловины сосуда канистру со спермой и извлекают одну гранулу и быстро переносят во флакон или ампулу с 1 см3 2,9%-ного раствора лимоннокислого натрия.
Время от извлечения гранулы из жидкого азота до переноса в водяную баню составляет не более 5 с, а время оттаивания гранулы в оттаивателе – 8-10 с.
Во время оттаивания флакон или ампулу осторожно покачивают, не доставая из водяной бани, до появления тонкого стерженька льда в грануле. После оттаивания спермы флакон или ампулу со спермой сразу вынимают из водяной бани или оттаивателя, протирают насухо и ставят в штатив. Температура в помещении пункта должна быть не ниже 18-20°С.
На предметное стекло, лежащее на нагревательном столике микроскопа, имеющем температуру 38-40°С, стеклянной палочкой или пипеткой наносят каплю оттаянной спермы из флакона или ампулы, накрывают покровным стеклом и оценивают. Качество оттаянной спермы определяют под микроскопом по подвижности сперматозоидов. При положительной оценке ее помещают в инструмент для осеменения. Оттаянную сперму необходимо использовать в течение 10-15 мин.
Категорически запрещается оттаивать гранулы при комнатной температуре или в одном флаконе более одной гранулы, а также оставлять оттаянную сперму в водяной бане или оттаивателе.
Необлицованные гранулы замороженной спермы должны быть правильной округлой формы объемом 0,2 см3. Гранулы объемом менее 0,2 см3 или имеющие сколы, а также половинки и осколки гранул должны быть выбракованы, о чем составляют соответствующий акт и высылают рекламацию в организацию по искусственному осеменению.
